timsTOF Pro 在 4D DIA 蛋白组学中的应用优势
随着生物医学、药物研发和精准医疗的不断发展,蛋白组学技术正逐渐从基础研究走向临床转化。而数据无依赖采集(DIA, Data-Independent Acquisition)则因其高通量、高重现性、低缺失率等特性,在大规模蛋白质定量分析中崭露头角。但传统DIA方法仍面临“共碎片干扰严重、识
磷酸化蛋白质组学实验常见问题及解决方案
蛋白磷酸化是最关键的翻译后修饰之一,广泛参与细胞信号转导、代谢调控、细胞周期等生物过程。随着质谱技术的发展,磷酸化蛋白质组学已成为研究信号通路动态调控机制的重要手段。然而,磷酸化修饰本身的低丰度、不稳定性以及富集效率差等问题,仍然为实验带来诸多挑战。 一、磷酸化蛋白样本准备中的常见问题 1、蛋白磷
如何进行基于CNBr切割的膜蛋白提取?
膜蛋白由于其疏水性强、空间构象复杂、在细胞膜中含量低等特点,使其在蛋白质组学研究中面临极大的挑战。传统胰蛋白酶(Trypsin)消化方法在膜蛋白样本中往往效率较低,易导致蛋白识别率低、重复性差。而溴化氰(Cyanogen Bromide, CNBr)切割法,因其特异性识别甲硫氨酸(Methionin
如何进行膜蛋白富集?最有效的方法有哪些?
膜蛋白(membrane proteins)是连接细胞内外信号通路的重要桥梁,约占人类基因组蛋白的30%以上,其中包括大量药物靶点(如GPCRs、离子通道、受体等)。然而,由于其疏水性强、溶解性差、表达量低等特性,膜蛋白在蛋白组学分析中常常“难以被识别”。因此,膜蛋白富集是高
如何通过LC-MS/MS实现高通量Shotgun蛋白质鉴定?
要实现高通量的 Shotgun蛋白质鉴定,LC-MS/MS(液相色谱-串联质谱) 是目前最主流、最有效的策略之一。它能够在复杂样本中快速解析数千种蛋白质,广泛应用于基础研究、疾病机制解析、药物靶点发现等领域。 一、什么是Shotgun蛋白质组学? Shotgun蛋白质组学,又称为“底物
N末端蛋白测序
N末端蛋白测序是一种用于确定蛋白质分子氨基酸序列起始端(N-末端)的方法。这一技术通过分析蛋白质链上游的氨基酸序列,揭示蛋白质的结构和功能特性,为深入理解蛋白质的生物学功能、翻译后修饰、加工过程以及结构域特征提供信息。N末端蛋白测序在蛋白质组学、药物研发、生物医学研究等领域具有广泛应用,尤其在蛋白质
如何利用靶向质谱验证PTM?
蛋白质翻译后修饰(Post-Translational Modifications, PTMs)是调控细胞命运、信号转导、代谢平衡等核心生命过程的关键机制,常见修饰包括磷酸化、乙酰化、泛素化、甲基化等。尽管高通量质谱(如DDA和DIA)已广泛应用于PTM位点的初筛,但在后续修饰位点的验证与定量阶段,
靶向PTM分析的流程是什么?
蛋白质翻译后修饰(Post-Translational Modifications, PTMs)广泛参与细胞信号转导、代谢调控、基因表达等关键生命过程,其动态变化往往是疾病发生、发展及治疗响应的重要分子标志。随着质谱技术的快速发展,靶向PTM分析成为解析复杂生物系统调控机制的有力工具。相比全局蛋白组
什么是共免疫沉淀 (Co‑IP)?
在蛋白质功能研究和信号通路解析的实验室日常中,共免疫沉淀(Co-immunoprecipitation, Co-IP) 几乎是每一位生命科学研究者都会接触到的重要技术。它不仅是验证蛋白质–蛋白质相互作用的“金标准”方法之一,还是连接免疫学与现代质谱组学的关键桥梁。
如何进行非靶向代谢组学?
非靶向代谢组学是在不预先设定目标化合物的前提下,通过高分辨质谱(如 LC-MS/MS 或 GC-MS)分析生物样本中上千种代谢物,以捕捉在疾病、环境变化或药物干预等条件下的代谢扰动。非靶向代谢组学(Untargeted Metabolomics)是一种系统地分析生物样本中尽可能多代谢物的小分子组学方
